Question

descreva um experimento para determinar o pH ótimo de ação de uma protease na digestão da clara do ovo e indique um teste que permita verificar a ocorrência da digestão.

Answer 1

Você pode pegar uma determinada concentração de protease com temperatura ótima conhecida, e de clara de ovo, colocar esses componentes em tubos de ensaio com soluções tampão com diferentes valores de pH. Determine um tempo fixo para a reação (Ex.: 10min). Depois, pare a reação colocando os tubos de ensaio em gelo. E faça uma eletroforese com as soluções após a catalise enzimática. A solução que apresentar um padrão de bandas pequenos e em maior quantidade é aquele onde a enzima conseguiu digerir com mais eficiência.

Answer 2

Resposta:

Explicação:

: Para verificar o pH ideal de funcionamento da protease para digerir a proteína da clara de ovo basta colocar clara de ovo e protease em vários recipientes com pH’s variados. Onde houver melhor digestão, lá será o pH adequado para a protease funcionar.

Mas, como saber que houve a digestão?

- Primeiro modo: Os tubos com proteína albumina intacta apresentarão mudança de coloração quando submetidos ao aquecimento, uma vez que a albumina (clara do ovo) crua é semi-transparente e a desnaturada é branca; nos tubos com albumina digerida completamente, não haverá proteína, mas aminoácidos, que não desnaturam (pois não tem estrutura quaternária, terciária e secundária a serem perdidas) e não vão ficar esbranquiçados com a presença de calor.

- Segundo modo: Na proteína intacta, não há grupos amina ou carboxila livres (uma vez que estes estão envolvidos na ligação peptídica, uma ligação amida). Na proteína digerida, como as ligações peptídicas estarão quebradas, os grupos amina ou carboxila estarão livres, estando susceptíveis a reações químicas de identificação de base/amina ou carboxilas/ácidos.

- Terceiro modo: A pressão osmótica de uma solução é função de seu número de partículas. Nas proteínas intactas o número de partículas será menor que na proteína digerida (que é quebrada em vários aminoácidos). Assim, a proteína digerida em aminoácidos terá pressão osmótica maior que a proteína não digerida, o que é verificável por um osmômetro.  

- Tente imaginar outro modo!