Situação experimental da aula: Houve um crime, e vocês foram convocados para a identificação do criminoso, com base no material biológico obtido da cena do crime.
Etapas para a realização da análise:
1. Extração de DNA genômico a partir do sangue obtido no local
2. Preparo da reação de PCR
a. Cálculo do meio de reação: é necessário calcular qual o volume necessário de cada reagente, a partir da concentração inicial e final desejadas. Os reagentes adquiridos dos respectivos fabricantes são entregues em uma concentração específica, a saber:
- dNTPs = 2,5mM
- MgCl2 = 50mM
- Primers (senso e antisenso) = 20pmol/μL
- Taq polimerase = 5U/mL
- Solução tampão (preparo in house) = 10x
- Amostra = cada uma terá uma concentração de DNA diferente, em função da eficiência da extração.
FUNÇÃO DE CADA REAGENTE:
H2O:
Tampão:
dNTPs:
MgCl2:
Primers:
Taq polimerase:
Sendo que todos devem possuir resultados: Inicial da solução, final na PCR, Volume por amostra e Mix de reação.
Respostas
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Resposta:
Você conseguiu alguma resposta? eu tenho uma atividade exatamente assim e eu não sei responder
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