Respostas
a replicação viral segue as seguintes etapas:
1. adsorção (Spike/receptor);
2. liberação genoma Viral p/ interior celular;
3. tradução de enzimas do complexo; Replicação/Transcrição (pol1ab);
4. Transcrição do RNAm em segmentos de polaridade negativa;
5. transcrição do RNAm em segmentos de polaridade +;
6. tradução de proteínas estruturais;
7. replicação do RNA gênomico;
8. composição do novo vírion;
9. liberação da partícula viral.
Os coronavírus são grandes vírus de RNA envelopados, de importância médica e veterinária. A replicação do coronavírus envolve a troca de quadros de ribossomos durante a tradução do genoma, a síntese de espécies genômicas e múltiplas de RNA subgenômico e a montagem de virus da progênie por um caminho único entre os vírus de RNA envolvidos. O progresso na investigação desses processos foi aprimorado pelo desenvolvimento de sistemas genéticos reversos, um avanço até então obstruído pelo enorme tamanho do genoma do coronavírus. A marca registrada da transcrição do coronavírus é a produção de vários mRNAs subgenômicos que contêm sequências correspondentes às duas extremidades do genoma. (A transcrição é definida como o processo pelo qual os mRNAs do tamanho de subgenoma são produzidos e a replicação do coronavírus é o processo pelo qual é produzido o RNA do tamanho de genoma, que também funciona como mRNA.) Assim, a geração de mRNAs subgenômicos envolve um processo de transcrição descontínua. O RNA genômico do coronavírus de aproximadamente 30.000 nucleotídeos codifica proteínas estruturais do vírus, proteínas não estruturais que têm um papel crítico na síntese do RNA viral (que iremos chamar de proteínas replicase-transcriptase) e proteínas não estruturais que não são essenciais para a replicação do vírus na célula cultura, mas parecem conferir uma vantagem seletiva in vivo (à qual nos referiremos como proteínas específicas de nicho). Pelo menos uma proteína específica de nicho, a proteína não estrutural 2 (nsp2) e uma proteína estrutural, a proteína nucleocapsídeo (N), estão envolvidas na síntese do RNA viral.
A expressão dos genes da proteína replicase-transcriptase do coronavírus é mediada pela tradução do RNA genômico. As proteínas replicase-transcriptase são codificadas na estrutura de leitura aberta 1a (ORF1a) e ORF1b e são sintetizadas inicialmente como duas grandes poliproteínas, pp1a e pp1ab. A síntese de pp1ab envolve a mudança de quadro ribossômico programado durante a tradução de ORF1a. Durante ou após a síntese, essas poliproteínas são clivadas por proteinases codificadas por vírus com dobras do tipo papaína (PLpro) e do tipo quimotripsina em 16 proteínas; nsp1 a nsp11 são codificados em ORF1a e nsp12 a nsp16 são codificados em ORF1b. As proteínas replicase-transcriptase, juntamente com outras proteínas virais e, possivelmente, proteínas celulares, se agrupam em complexos de replicação-transcrição ligados à membrana (RTC). (Usaremos o termo RTC para descrever complexos que copiam ou produzem RNA com comprimento de genoma ou subgenoma.) Esses complexos se acumulam nas regiões perinucleares e estão associados a vesículas de membrana dupla. Os domínios transmembranares hidrofóbicos estão presentes em nsp3, nsp4 e nsp6 e provavelmente servem para ancorar as nascentes poliproteínas pp1a / pp1ab às membranas durante o primeiro passo da formação de RTC.3
O mecanismo de replicação de coronavírus por este meio tomará a replicação de MHV (vírus da hepatite de rato) por coronavírus. (Figura em anexo)
Fig. em anexo: Resumo da replicação do vírus da hepatite de camundongo (MHV). O MHV se liga ao receptor de célula hospedeira CEACAM-1 através da interação da glicoproteína de espiga (S). A entrada do vírus na célula hospedeira pode ocorrer através da fusão com a superfície da célula hospedeira, com a liberação subsequente do RNA genômico no citoplasma. Alternativamente, o MHV pode entrar na célula hospedeira através da formação de vesículas endocíticas, e o RNA genômico é liberado no citoplasma após a fusão com a membrana da vesícula (não mostrado). A tradução do RNA genômico de cadeia positiva dá origem a uma grande poliproteína que sofre processamento proteolítico para gerar uma polimerase de RNA dependente de RNA. Através da ação da RNA polimerase, é gerado um modelo de cadeia negativa antisense de tamanho completo. Os mRNAs subgenômicos são sintetizados, presumivelmente a partir de modelos de cadeia negativa subgenômicos. A tradução de mRNAs subgenômicos dá origem a proteínas virais estruturais. A glicoproteína S é expressa na superfície da célula hospedeira e isso pode contribuir para a fusão com células não infectadas vizinhas por ligação ao CEACAM-1. A montagem do vírus ocorre dentro das vesículas, seguida pela liberação do vírus pela fusão de vesículas contendo virion com a membrana plasmática. O vírus liberado pode infectar outras células e se replicar na célula-mãe através da ligação ao CEACAM-1. E, proteína do envelope; ER, retículo endoplasmático; M, proteína de membrana; N, proteína nucleocapsídica; ORF, quadro de leitura aberto.
