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INTERFERENTES NA EXTRAÇÃO DE DNA E RNA
Diversos tipos de amostras podem ser utilizadas para a extração, desde sangue até um único fio de cabelo. Entretanto, a amostra também irá determinar a qualidade do material extraído.
A quantidade de DNA purificado depende do tipo de amostra e do número de células presentes que pode variar, por exemplo, conforme a idade do paciente e seu estado de saúde e também devido as condições de transporte, armazenamento e idade das amostras. O volume utilizado é um fator muito importante.
Amostras frescas e congeladas de sangue terão um rendimento diferente. Amostras de sangue estocadas em temperatura ambiente ou 4°C por alguns dias ou semanas respectivamente, podem ainda permitir isolamento de DNA. Porém, o rendimento e a qualidade do DNA podem diminuir devido ao armazenamento prolongado nestas condições. Certamente a qualidade e o rendimento de amostras se sangue fresco serão bem maiores do que amostras de sangue congeladas por anos.
Existem diversos kits para extração de DNA e RNA disponíveis no mercado, mas é imprescindível escolher qual é o kit ideal para atender ao que você necessita. É preciso levar em consideração a otimização do rendimento e a degradação do DNA ou RNA durante a extração, a sua eficiência em termos de custo, tempo e simplicidade da metodologia. Além disso, há a preocupação com componentes de baixo risco para o usuário, gerando ainda o mínimo possível de resíduos perigosos.
Passos para realizar a Extração e Purificação de DNA
Alguns procedimentos básicos são realizados para isolar e purificar o DNA. São eles:
Etapa de Lise – o primeiro passo consiste em realizar a lise (quebra) da célula para expor o DNA.
Ligação – uma membrana de sílica retém e concentra o DNA.
Etapa de Lavagem – quebrar e emulsionar a gordura e as proteínas que formam a membrana da célula. Isto normalmente é feito utilizando soluções detergentes e por centrifugação. As etapas de lavagem removem estes resíduos contaminantes, restando apenas a membrana com o DNA.
Etapa de Eluição – por fim ocorre a liberação dos ácidos nucléicos (DNA/ RNA) da membrana. Isto proporciona o DNA purificado pronto para ser utilizado em diferentes aplicações.
O rendimento e a qualidade do DNA extraído dependem muito do kit utilizado e podem interferir no resultado de testes realizados posteriormente. Por isso a obtenção de DNA de alta qualidade é essencial, garantindo assim o sucesso das etapas seguintes.
Quando se fala em PCR essa escolha é decisiva, pois a sensibilidade de detecção é diferente e a demora em algumas etapas pode aumentar a probabilidade de falha devido à manipulação, alterando o resultado final.
Leia mais: Como a PCR é utilizada na Ciência Forense
Kit de Extração de DNA Kasvi
O Kit de Extração Kasvi Mini Spin é a ferramenta ideal para uma extração e purificação manual simples, rápida e eficiente de DNA genômico. Devido à alta pureza, o DNA genômico extraído fica pronto para uso em um grande painel de aplicações em Biologia Molecular, nos mais variados segmentos laboratoriais, inclusive em diagnóstico in vitro, ou poderá ser armazenado a -20°C para uso subsequente.
As seguintes amostras foram validadas para uso com o Kit Kasvi:
Sangue total;
Buffy coat;
Cultura de células;
Soro, plasma e outros fluidos corpóreos.
Também é possível purificar DNA viral e bacteriano de amosta