Você trabalha em uma pesquisa científica com células de câncer de mama e está testando um novo tratamento. Para avaliar o resultado desse tratamento, você deve analisar a diferença da expressão de um gene específico antes e depois do tratamento, da maneira mais precisa possível. Para isso, é importante que você consiga observar até mesmo pequenas diferenças na expressão desse gene.
a) Qual é o método de PCR abordado nesta Unidade de Aprendizagem que você utilizaria para fazer essa análise? Por quê?
b) Quais são as principais diferenças entre a PCR tradicional e a PCR em tempo real?
Respostas
Resposta:
Padrão de resposta esperado
a) PCR em tempo real, pois permite a quantificação da expressão gênica, sendo um método mais preciso e mais sensível.
b) As principais diferenças são:
- A PCR em tempo real é quantitativa e a PCR tradicional não.
- A PCR em tempo real mede a amplificação em tempo real. Já a PCR tradicional faz medição após o fim de todos os ciclos.
- A PCR em tempo real utiliza uma sonda com fluoróforo, enquanto a PCR tradicional não a utiliza.
- A PCR em tempo real deve ser feita em tubos de vidro para a passagem da fluorescência.
Explicação:
A técnica PCR (Polymerase Chain Reaction ou Reação em Cadeia da Polimerase) consiste basicamente na amplificação “in vitro” de uma região específica de DNA com intuito de aumentar o número de cópias deste, a fim de produzir material suficiente para as diversas análises.