O surgimento de novas técnicas em biologia molecular tem alterado grandemente as formas de abordagens dos problemas básicos e aplicados nessa área. O desenvolvimento da técnica de amplificação de fragmentos de DNA, a reação em cadeia da polimerase (PCR), abriu enormes perspectivas em várias áreas do conhecimento.
Em relação as principais técnicas resultantes de modificações da PCR, ASSOCIE corretamente as colunas a seguir:
Coluna I
a) Nested-PCR
b) PCR em tempo real
c) RT-PCR
d) PCR multiplex
e) PCR convencional
Coluna II
( ) Na fase inicial, a presença da enzima transcriptase reversa converte o RNA em um DNA complementar (cDNA). Após a formação do cDNA, é continuada a PCR.
( ) À medida que o DNA é amplificado, o nível de fluorescência cresce proporcionalmente, pois, junto aos oligonucleotídeos (primers), são inseridas sondas marcadas que emitem sinal de fluorescência quando clivadas pela enzima exonuclease 5’- 3', assim que vai sendo finalizada a adição dos nucleotídeos.
( ) O produto utilizado para iniciar a amplificação é o de uma primeira PCR feita de forma tradicional. Além disso, adiciona-se um par de primers internos ao par utilizado na primeira reação, gerando um produto menor no final das duas etapas
( ) Para a amplificação são necessários oligonucleotídeos, pequenas sequências de nucleotídeos (primers), que irão se ligar na sequência de DNA alvo e fazer com que a enzima polimerase comece a adicionar os nucleotídeos complementares à fita da molécula.
( ) Em uma única reação, reproduz várias regiões diferentes do DNA ao mesmo tempo. Para isso, são adicionados, no mesmo recipiente, vários pares de primers específicos para cada sequência a ser identificada.
ASSINALE a sequência correta:
Alternativas
Alternativa 1:
A-B-C-D-E.
Alternativa 2:
A-C-D-B- E.
Alternativa 3:
B-C-E-D-A.
Alternativa 4:
C-B-A-E-D.
Alternativa 5:
D-E-A-B-C.
Respostas
Resposta: alternativa 4 (c-b-a-e-d)
Explicação:
RT-PCR = é um método laboratorial usado que utiliza a enzima transcriptase reversa para transformar o RNA do vírus em DNA complementar (cDNA)
PCR em tempo real = a reação em cadeia de polimerização em tempo real combina metodologia de PCR convencional em um mecanismo de detecção e quantificação por fluorescência. A metodologia permite que os processos de amplificação detecção e quantificação de DNA seja realizadas em uma única etapa, agilizando a obtenção de resultados e diminuindo o risco de contaminação de amostras e dando maior precisão
nested-pcr = é uma modificação da reação em cadeia da polimerase destinada a reduzir a ligação não específica em produtos devido a amplificação de sítios de ligação inesperados do prime
pcr convencional = consiste na replicação de sequências específicas de DNA utilizando equipamentos termocicladores. Para realizar reação acrescenta-se as amostras de material genéticos sequências iniciadoras complementares (também conhecida como primer) desoxirribonucleotídeos e DNA polimerase termo resistente.
pcr multiplex = este processo amplifica o DNA em amostras usando vários primes e uma polimerase de DNA medida por temperaturas em um termociclador
Resposta:
alternativa 4 : c, b, a, e, d
Explicação: resposta começa na pag 91