a) Quais os processos o profissional de histologia deverá fazer até a obtenção da lâmina com um corte histológico da biópsia? CITE cada etapa do processo e EXPLIQUE resumidamente com suas palavras o objetivo de cada etapa.
Respostas
Resposta:
PASSO A PASSO: PREPARAÇÃO DO TECIDO PARA ANÁLISE HISTOPATOLÓGICA
1. Coleta
É a primeira etapa e consiste na retirada de uma amostra de tecido para a investigação, chamadas de biópsias:
Biópsia cirúrgica: através de uma incisão cirúrgica no órgão ou tecido.
Biópsia endoscópica: para órgãos ocos, como estômago e intestino.
Biópsia por agulha: é obtida pela punção do órgão (fígado, pulmão), sem precisar abrir a cavidade natural.
Cirurgia ampla: corresponde a peças grandes (tumores) ou órgãos (mama e útero).
Necrópsia: pós morte para verificar a causa do óbito.
Essa amostra removida durante uma biópsia é chamada de espécime. Os cassetes histológicos são usados para acomodar esses espécimes e também durante todas as etapas de preparação do tecido.
2. Fixação
Ao se remover qualquer material (órgão ou tecido) de um organismo se inicia um processo de autólise (autodigestão). A fixação evita a autólise celular e impede a proliferação de microrganismos, preservando a morfologia do tecido e fornecendo maior resistência para as etapas seguintes.
Dessa forma, a fixação utiliza processos físicos ou químicos para imobilizar as substâncias constituintes das células e dos tecidos. Os agentes fixadores mais utilizados são o formol tamponado e o líquido de Bouin.
3. Desidratação
Consiste na remoção da água dos tecidos. Vários métodos são utilizados, porém o mais comum compreende uma série de soluções alcoólicas em concentrações diferentes, chegando até o álcool 100%.
4. Clarificação ou diafanização
Essa etapa remove totalmente o álcool, preparando o espécime para a etapa seguinte. Para remover o álcool e preparar o tecido para a penetração da parafina, utiliza-se o xilol. Conforme o xilol penetra o tecido, em substituição ao álcool, o material se torna mais claro, transparente. Por essa razão, é denominada de clarificação.
5. Inclusão
Mesmo após a fixação e a desidratação, as amostras de tecido são ainda muito frágeis. Acontece então a impregnação do tecido com uma substância de consistência firme. Assim o tecido é endurecido, o que facilita o corte em camadas finas.
A parafina é a mais utilizada neste procedimento. Além do fácil manuseio e bons resultados, endurece em poucos minutos e preenche os lugares anteriormente ocupados pela água. Forma-se um bloco de parafina, que contém o espécime em seu interior.
Os cassetes histológicos são utilizados durante todos os processos, até mesmo na inclusão. Eles permitem escrever o número de registro do material, identificando o espécime. Também são importantes para a microtomia, pois podem ser adaptados ao micrótomo.
6. Microtomia
Depois de endurecido, o bloco de parafina deve ser cortado em seções extremamente finas, que permitam a visualização do tecido ao microscópio. Para isso, é utilizado o equipamento de precisão micrótomo, que alcança a espessura dos cortes de 5 a 15 μm (micrômetros).
1 micrômetro (μm) é igual a 1/1.000 de 1 milímetro (mm). Assim, os cortes dos tecidos, extremamente finos e transparentes, são montados em lâminas de vidro.
7. Coloração
Como as seções de parafina são incolores, os espécimes não estão ainda adequados para exame com microscópio de luz. São então corados para possibilitar a análise.
A parafina deve ser dissolvida e removida. Em seguida os tecidos na lâmina são reidratados por meio de uma série de soluções de álcool em concentrações decrescentes.
Os cortes de tecido podem então ser corados com hematoxilina. Por sua natureza básica, a hematoxilina vai corar os ácidos nucleicos dos núcleos.
Em seguida, os cortes são lavados em e corados pela eosina, um corante de natureza ácida e que irá corar os componentes básicos predominantes no citoplasma das células.
Finalmente após a coloração, os cortes são protegidos por uma lamínula e podem ser analisados por microscopia.
O passo a passo consiste em coleta, fixação, desidratação, clarificação, inclusão, microtomia e coloração.
Para um melhor entendimento da resposta, faz-se necessário a compreensão de alguns conhecimentos sobre a histologia.
Coleta
Consiste na coleta de uma amostra de tecido para análise.
Essa amostra costuma ser removida durante uma biópsia, ou retirada em uma necrópsia.
Fixação
A fixação evita a proliferação de microrganismos pelo fato do tecido não estar estar junto a um organismo, então são adicionados produtos químicos para a preservação do tecido.
Dessa forma, são utilizados processos para imobilizar as células e dos tecidos, evitando que elas apodreçam para que se consiga analisar a amostra no microscópio.
Desidratação
Consiste na remoção da água restante dos tecidos. Para esta etapa, utiliza-se soluções alcoólicas com uma concentração alta de alcoól acima de 70%, para a retirada de água total da lâmina.
Clarificação
Essa etapa visa a remoção total do álcool, preparando a lâmina para as próximas etapas.
Inclusão
Acontece então o endurecimento do tecido com uma substância de consistência firme.
O endurecimento do tecido serve para facilitar seu corte em camadas finas.
Microtomia
O bloco deve ser cortado em seções finas, para a facilitação da visualização no microscópio.
Coloração
Como as seções cortadas foram endurecidas anteriores com parafina e estas são incolores, a lâmina não conseguiria ser vista em um exame com microscópio. Então, é corada para a análise.
Finalmente após a coloração, os cortes são protegidos com uma película e podem ser analisados por um especialista.
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