8) Uma cultura de bactérias cresceu em um meio com N15 até que todo o seu DNA celular estivesse marcado. O meio de cultura foi então trocado para um com N14 e as bactérias foram deixadas neste meio por dois ciclos celulares. Se depois disso o DNA desta cultura fosse sujeito à centrifugação em gradiente de densidade, qual seria a proporção de DNA em relação às fitas com N14 e com N15?
Respostas
Todo o DNA marcado com N15 = 100%
1º ciclo com N14 = 50% do DNA será leve
2º ciclo com N14 = 75% do DNA será leve e 25% pesado
Se depois disso o DNA desta cultura fosse sujeito à centrifugação em gradiente de densidade, a proporção de DNA em relação às fitas com N¹⁴ e com N¹⁵ seriam: 50% N¹⁵N⁴ e 50% N¹⁴N¹⁴.
A centrifugação em gradiente de densidade é um procedimento comum em microbiologia e citologia, usado para separar certas organelas de suas respectivas células para análise posterior de partes específicas das células.
As moléculas de DNA serão separadas, com base nas diferentes proporções de AT (pares de bases nitrogenadas de adenina e timina) em relação ao GC (pares de bases nitrogenadas de guanina e citosina).
Um par AT tem um peso molecular menor que um par GC, portanto, para duas moléculas de DNA de tamanho igual, aquele com a maior proporção de pares AT terá uma densidade mais baixa, sendo os demais fatores iguais.
Diferentes tipos de ácidos nucleicos também serão separados em bandas, por exemplo, o RNA é mais denso que os plasmídeos de DNA superenrolado, que é mais denso que o DNA cromossômico linear.